細胞名稱：NCI-H460人大細胞肺癌細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出25cm2培養瓶，75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態，然后換用新鮮*培養液繼續培養或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，zui后放入37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）待細胞*貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養基重懸，接種25cm2培養瓶，于37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）第二天，換用新鮮*培養基繼續培養。

原代細胞與細胞系有什么區別？細胞培養物來源于原代外植體或分散的細胞懸液。通常在這樣的培養物中細胞增殖形成匯合地單層細胞或密集地細胞懸液。根據傳統定義，*次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細胞生命周期有限，在有限的生命周期內需掌握好細胞zui大的生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的*性。細胞系是不斷生長，分化的細胞群，因其經過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫療或科研。實際上，連續細胞系可以用大量次培養基培養，隨著代數的增加細胞的基因型和表型都有可能發生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。

1、倍增和代數有什么區別？倍增是培養物中細胞總數加倍，通常是指細胞指數或對數生長期。代數是指細胞群從培養瓶中移出，傳代培養過程的次數，傳代培養的目的是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。

2、接收到的凍存細胞該如何處理？收到包裝箱后，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。

3、有多少經驗才能開始正常人類細胞培養？推薦有經驗者在無菌環境下用層流凈化罩工作，如果有經驗的話對其它細胞類型也是很有利的。如果你是細胞培養的初學者或打算建立細胞培養實驗室，我們會為你提供幫助。請的細胞培養專家。

售后服務告知書

1）細胞出現問題，可重發的情況有哪些？判定標準是什么？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發；

2. 細胞污染問題，請在收到產品48小時內，給我們提出真實的實驗結果，核實后重發；

3. 常溫發貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇后24小時后，絕大多數細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態照片），重發；

4. 干冰凍存發貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發貨的細胞靜置4小時候并且未開封，出現污染，重發；

5. 細胞活性問題，請在收到產品7天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發；

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，3天未告知的，視為產品合格。4-7天內出現問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的，并跟技術人員溝通的，由技術人員判定為我方責任的，重發。技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協商處理或者按合同價的50%收費重發。

二）細胞出現問題，不予以重發的情況有哪些？

1. 客戶造成細胞污染，不重發；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態不好，不重發；

3. 非本庫推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發；

4. 細胞狀態不好，未提供細胞培養前3天照片的，不重發；

5. 細胞培養時經其它處理的，不重發；

6. 細胞收到2天內，未告知，不重發；

7. 視具體情況而定。

YS4071C人前列腺癌細胞DU 145

YS4072C人肝癌細胞Hep G2

YS4073C人神經母細胞瘤細胞SK-N-SH

YS4074C人乳腺癌細胞SK-BR-3

YS4075C人結腸腺癌細胞SW480

YS4076C人骨肉瘤細胞MG-63

YS4077C人乳腺癌細胞MDA-MB-231

YS4078C人結腸腺癌細胞Caco-2

YS4079C人肝癌細胞Hep 3B2.1-7

YS4080C人表皮樣癌皮膚鱗狀細胞癌細胞A-431

YS4081C人腦膠質母細胞瘤細胞U-87 MG

YS4082C人慢性粒細胞白血病細胞K-562

YS4083C人急性早幼粒細胞白血病細胞HL-60

YS4084C人EBV伯基特淋巴瘤Raji

YS4085C人急性單核細胞白血病U-937

YS4086C人急性淋巴細胞白血病細胞CCRF-CEM

YS4087C人伯基特淋巴瘤細胞Daudi

YS4088C人急性淋巴細胞白血病MOLT-4

YS4089C人大細胞肺癌細胞NCI-H460

YS4090C人非小細胞肺癌細胞NCI-H1299

YS4091C人結腸腺癌細胞COLO 205

YS4092C人結腸腺癌細胞DLD-1

YS4093C人前列腺癌細胞LNCaP clone FGC

YS4094C人肺癌細胞A549

YS4095C人前列腺癌細胞PC-3

YS4096C人胃腺癌細胞AGS

YS4097C人宮頸腺癌細胞HeLa S3

YS4098C人神經母細胞瘤細胞SH-SY5Y

YS4099C人結腸癌細胞T84

YS4100C人乳腺癌細胞MCF7

YS4101C人乳腺管癌細胞T-47D

YS4102C人急性單核巨噬細胞白血病細胞THP-1

YS4103C人正常乳腺上皮細胞MCF 10A

YS4104C人胚腎上皮細胞-表達SV40T抗原293FT

YS4105C人腦多形性膠質母細胞瘤細胞T98G

YS4106C小鼠單核巨噬細胞白血病細胞RAW 264.7

YS4107C人皮膚腺癌細胞Hs 865.Sk

YS4108C小鼠成肌細胞C2C12

YS4109C人胃癌細胞SNU-16

YS4110C人B淋巴細胞瘤伯基特淋巴瘤細胞Ramos

YS4111C人肺癌細胞NCI-H661

YS4112C人結腸腺癌細胞LS 174T

YS4113C人肺癌細胞A-427

YS4114C 大鼠胰腺beta細胞大鼠胰島素瘤細胞RIN-5F

YS4115C人外周血套細胞淋巴瘤細胞Mino

YS4116C人外周血套細胞淋巴瘤細胞JeKo-1

YS4117C人套細胞淋巴瘤細胞REC1

YS4118C人彌漫性大B細胞淋巴瘤細胞SU-DHL-6

YS4119C人套細胞淋巴瘤細胞JVM2

YS4120C人逆轉錄病毒包裝細胞系Plat-E

YS4121C人結腸癌細胞RKO

YS4122C人主動脈血管平滑肌細胞T/G HA-VSMC

YS4123C人正常前列腺上皮細胞RWPE-1

YS4124C正常人結腸組織細胞CCD-18Co

YS4125C類成淋巴細胞系GM24385 (LCL from B-Lymphocyte)

YS4126C人皮膚成纖維細胞BJ

YS4127C小鼠骨髓瘤淋巴母細胞/雜交瘤B淋巴細胞IVA12

YS4128C人肺癌腺癌細胞LC-2/ad

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